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頭蛋白shRNA和骨形態發生蛋白2的協同作用對骨髓間充質干細胞成骨能力的影響
張瑞萍; 邱相君; 蘇兵; 鄭路路 洛陽市第一人民醫院; 河南洛陽471002; 河南科技大學; 河南洛陽471003; Quater診斷實驗室; 紐約布法羅14200
- 間質干細胞
- 骨髓
- 骨形態發生蛋白質2
- 轉染
- 頭蛋白
摘要：目的:觀察頭蛋白shRNA和骨形態發生蛋白2(bonemorphogeneticprotein2,BMP-2)的協同作用對骨髓間充質干細胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)成骨能力的影響。方法:分離、培養兔BMSCs,分為頭蛋白shRNA基因干擾組、BMP-2過表達組、雙基因轉染組。構建慢病毒頭蛋白shRNA干擾載體和BMP-2過表達載體。頭蛋白shRNA基因干擾組、BMP-2過表達組分別加入頭蛋白shRNA基因干擾載體和BMP-2過表達載體,雙基因轉染組同時加入頭蛋白shRNA基因干擾載體和BMP-2過表達載體,進行基因轉染。基因轉染成功后,采用熒光定量PCR檢測3組BMSCs中頭蛋白和BMP-2的mRNA相對表達量,采用茜素紅染色和堿性磷酸酶染色檢測3組BMSCs的誘導成骨能力。結果:①細胞培養和基因轉染鑒定結果。流式細胞儀檢測第2代培養細胞,CD44和CD29表達分別為61.3%和57.2%,CD34和CD45表達分別為3.6%和2.4%,符合BMSCs表型特征。基因轉染72h后,3組BMSCs的轉染率為(92.5±2.5)%,基因轉染成功。②頭蛋白和BMP-2mRNA表達檢測結果。基因轉染成功后,3組細胞中頭蛋白mRNA相對表達量的組間總體比較,差異有統計學意義(0.343±0.124,1.040±0.269,0.123±0.057;F=22.390,P=0.002);BMP-2過表達組較頭蛋白shRNA基因干擾組和雙基因轉染組高(P=0.016,P=0.005),頭蛋白shRNA基因干擾組和雙基因轉染組的組間差異無統計學意義(P=0.054)。3組細胞中BMP-2mRNA相對表達量的組間總體比較,差異有統計學意義(1.120±0.363,3.667±0.431,4.833±0.475;F=59.680,P=0.000)。雙基因轉染組較頭蛋白shRNA基因干擾組和BMP-2過表達組高(P=0.000,P=0.035),BMP-2過表達組高于頭蛋白shRNA基因干擾組(P=0.001)。③茜素紅和堿性磷酸酶染色結果。茜素紅染色可見胞漿邊緣呈現不透光的礦化結節。3組細胞茜素紅染色陽性率的組間總體比較,差異有統計學意義[(62.317±3.969)%,(39.267±2.170)%,(72.320±4.133)%,F=68.870,P=0.000];雙基因轉染組高于頭蛋白shRNA?
- 間質干細胞
- 骨髓
- 骨形態發生蛋白質2
- 轉染
- 頭蛋白
摘要：目的:觀察頭蛋白shRNA和骨形態發生蛋白2(bonemorphogeneticprotein2,BMP-2)的協同作用對骨髓間充質干細胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)成骨能力的影響。方法:分離、培養兔BMSCs,分為頭蛋白shRNA基因干擾組、BMP-2過表達組、雙基因轉染組。構建慢病毒頭蛋白shRNA干擾載體和BMP-2過表達載體。頭蛋白shRNA基因干擾組、BMP-2過表達組分別加入頭蛋白shRNA基因干擾載體和BMP-2過表達載體,雙基因轉染組同時加入頭蛋白shRNA基因干擾載體和BMP-2過表達載體,進行基因轉染。基因轉染成功后,采用熒光定量PCR檢測3組BMSCs中頭蛋白和BMP-2的mRNA相對表達量,采用茜素紅染色和堿性磷酸酶染色檢測3組BMSCs的誘導成骨能力。結果:①細胞培養和基因轉染鑒定結果。流式細胞儀檢測第2代培養細胞,CD44和CD29表達分別為61.3%和57.2%,CD34和CD45表達分別為3.6%和2.4%,符合BMSCs表型特征。基因轉染72h后,3組BMSCs的轉染率為(92.5±2.5)%,基因轉染成功。②頭蛋白和BMP-2mRNA表達檢測結果。基因轉染成功后,3組細胞中頭蛋白mRNA相對表達量的組間總體比較,差異有統計學意義(0.343±0.124,1.040±0.269,0.123±0.057;F=22.390,P=0.002);BMP-2過表達組較頭蛋白shRNA基因干擾組和雙基因轉染組高(P=0.016,P=0.005),頭蛋白shRNA基因干擾組和雙基因轉染組的組間差異無統計學意義(P=0.054)。3組細胞中BMP-2mRNA相對表達量的組間總體比較,差異有統計學意義(1.120±0.363,3.667±0.431,4.833±0.475;F=59.680,P=0.000)。雙基因轉染組較頭蛋白shRNA基因干擾組和BMP-2過表達組高(P=0.000,P=0.035),BMP-2過表達組高于頭蛋白shRNA基因干擾組(P=0.001)。③茜素紅和堿性磷酸酶染色結果。茜素紅染色可見胞漿邊緣呈現不透光的礦化結節。3組細胞茜素紅染色陽性率的組間總體比較,差異有統計學意義[(62.317±3.969)%,(39.267±2.170)%,(72.320±4.133)%,F=68.870,P=0.000];雙基因轉染組高于頭蛋白shRNA?
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