摘要：目的構(gòu)建固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1(SREBP1)啟動子雙熒光素酶報告基因表達(dá)載體,為研究針對SREBP1靶點(diǎn)的天然活性抑制劑篩選奠定基礎(chǔ)。方法利用生物信息學(xué)軟件,對SREBP1基因5′端上游5 000 bp序列進(jìn)行啟動子預(yù)測與分析。應(yīng)用Gibson Assembly方法構(gòu)建啟動子雙熒光素酶載體,并將構(gòu)建成功的pGL3-SREBP1-pro重組質(zhì)粒和內(nèi)參質(zhì)粒p RL-SV40共轉(zhuǎn)染肝癌HepG2細(xì)胞并給予天然抑制劑大黃素,檢測SREBP1轉(zhuǎn)錄活性的抑制效果。結(jié)果 SREBP1基因5′端上游2 000 bp區(qū)域內(nèi)有啟動子特征序列,存在轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn);重組質(zhì)粒經(jīng)酶切及測序鑒定證實(shí)為陽性克隆,瞬時轉(zhuǎn)染肝癌HepG2細(xì)胞后經(jīng)雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測,所克隆的片段序列具有啟動子活性,該活性可被大黃素所抑制。結(jié)論成功構(gòu)建了pGL3-SREBP1-pro雙熒光素酶報告基因表達(dá)載體,并證實(shí)其活性,可為進(jìn)一步用于針對SREBP1靶點(diǎn)的天然活性抑制劑篩選奠定基礎(chǔ)。