內(nèi)蒙古絨山羊TNFRSF1A基因shRNA表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定

馬麗娜; 楊峰; 奈日樂(lè); 謝遇春; 米璐; 車(chē)天宇; 王志新; 王志英; 王瑞軍; 蘇蕊; 張燕軍; 劉志紅; 李金泉內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院; 動(dòng)物遺傳育種與繁殖自治區(qū)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 農(nóng)業(yè)部肉羊遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 內(nèi)蒙古自治區(qū)山羊遺傳育種工程技術(shù)研究中心; 呼和浩特010018

內(nèi)蒙古絨山羊
載體構(gòu)建
tnfrsf1a

摘要：通過(guò)設(shè)計(jì)和合成TNFRSF1A基因的3條靶向shRNA,并分別插入到pSGU6/GFP/Neo載體中,成功構(gòu)建出了3個(gè)干擾載體,通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)法將干擾載體成功轉(zhuǎn)入到內(nèi)蒙古絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞中,并利用RealTimePCR檢測(cè)TNFRSF1A基因的表達(dá)量。由結(jié)果可知,TNFRSF1A基因的干擾載體經(jīng)測(cè)序鑒定證明構(gòu)建成功,干擾載體轉(zhuǎn)染內(nèi)蒙古絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞24h后可見(jiàn)綠色熒光表達(dá),當(dāng)?shù)竭_(dá)48h時(shí),轉(zhuǎn)染效率達(dá)到最大,shRNA-1、shRNA-2、shRNA-3三組中TNFRSF1A的mRNA表達(dá)水平均低于轉(zhuǎn)染空載體的NC組,且shRNA2對(duì)TNFRSF1A的mRNA表達(dá)具有最佳的干擾效果。綜上所述,該研究成功構(gòu)建了TNFRSF1A干擾載體,為進(jìn)一步研究絨山羊TNFRSF1A基因在毛囊生長(zhǎng)與周期調(diào)控的作用奠定基礎(chǔ)。

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